Plasmide CRISPR/Cas9 KO DGCR2 (m): sc-419995

Présentation

Dgcr2 code pour la protéine DGCR2, une protéine transmembranaire enrichie dans les tissus neuraux en développement et impliquée dans des processus qui soutiennent la différenciation neuronale, la migration et la formation des circuits. DGCR2 est située dans la région synténique 22q11.2 et est étudiée dans le contexte de variations du nombre de copies qui influencent des phénotypes neurodéveloppementaux et la fonction synaptique. Dans des modèles murins, la perturbation de Dgcr2 est utilisée pour explorer comment une signalisation cellule–cellule altérée et des fonctions d’échafaudage associées à la membrane contribuent aux trajectoires du développement cérébral. Ces caractéristiques font de DGCR2 une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies à l’origine de vulnérabilités neurodéveloppementales et de changements, à l’échelle des systèmes, de la connectivité neuronale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DGCR2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dgcr2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dgcr2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dgcr2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DGCR2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dgcr2 pour l'étude de la signalisation de DGCR2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dgcr2 essentiels à la fonction de DGCR2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dgcr2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DGCR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DGCR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dgcr2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DGCR2 plasmide HDR (m) et le DGCR2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dgcr2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dgcr2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.