DGCR2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419995

Panoramica

Dgcr2 codifica DGCR2, una proteina transmembrana arricchita nei tessuti neurali in sviluppo e coinvolta in processi che supportano la differenziazione neuronale, la migrazione e la formazione dei circuiti. DGCR2 si trova nella regione sintenica 22q11.2 ed è studiata nel contesto di variazioni del numero di copie che influenzano fenotipi neuroevolutivi e la funzione sinaptica. Nei modelli murini, la perturbazione di Dgcr2 viene utilizzata per indagare come alterazioni della segnalazione cellula–cellula e dell’impalcatura associata alla membrana contribuiscano alle traiettorie di sviluppo del cervello. Queste caratteristiche rendono DGCR2 rilevante per studi meccanicistici sui pathway alla base della vulnerabilità neuroevolutiva e dei cambiamenti, a livello di sistema, nella connettività neurale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DGCR2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dgcr2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dgcr2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dgcr2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DGCR2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dgcr2 per lo studio della segnalazione di DGCR2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dgcr2 critici per la funzione di DGCR2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dgcr2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DGCR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DGCR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dgcr2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DGCR2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DGCR2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dgcr2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dgcr2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.