DGAT2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416229-ACT

Humanes DGAT2 (Diacylglycerol-O-Acyltransferase 2) ist ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym, das den letzten, festgelegten Schritt der Triacylglycerol-Biosynthese katalysiert, indem es Diacylglycerol mit Fettsäure‑Acyl‑CoA acyliert. Durch die Kontrolle der Produktion neutraler Lipide und der Biogenese von Lipidtröpfchen verknüpft DGAT2 die Fettsäureaufnahme und die de-novo-Lipogenese mit der zellulären Energiespeicherung und der Homöostase von Membranlipiden. Die DGAT2‑Aktivität überschneidet sich bei Nährstoffüberschuss mit lipidmetabolischen Programmen, die durch SREBP‑Signalgebung, das Gleichgewicht der β‑Oxidation und ER‑Stressantworten gesteuert werden. Eine fehlregulierte DGAT2‑Expression und die Anreicherung von Triglyceriden werden häufig im Zusammenhang mit metabolischen Störungen untersucht, darunter hepatische Steatose und Insulinresistenz, sowie mit lipidabhängigem Remodeling, wie es bei bestimmten Krebserkrankungen beobachtet wird.

DGAT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DGAT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DGAT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DGAT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DGAT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DGAT2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DGAT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DGAT2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DGAT2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DGAT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.