Dexras2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437366

Panoramica

Dexras2 (RASD2) è una piccola proteina legante il GTP, correlata a Ras e arricchita nei tessuti neurali, che funge da interruttore di segnalazione a valle dei recettori accoppiati a proteine G (GPCR) e delle vie della sintasi dell’ossido nitrico neuronale. Contribuisce ad accoppiare la stimolazione recettoriale a cambiamenti nella segnalazione dei nucleotidi ciclici, nelle risposte calcio-dipendenti e nella plasticità sinaptica, attraverso la modulazione dell’adenilil ciclasi e delle cascate di chinasi a valle. Nei sistemi di ratto, Dexras2 è stato utilizzato per indagare i meccanismi che controllano la segnalazione neuronale circadiana e quella legata alla dopamina, con rilevanza per fenotipi neurocomportamentali e circuiti responsivi allo stress. La disregolazione di nodi di segnalazione della famiglia RAS come Dexras2 è ampiamente informativa per studiare una trasduzione del segnale aberrante, l’eccitabilità neuronale e il cross-talk tra vie implicati nella disfunzione del SNC.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dexras2 (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dexras2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di Dexras2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di Dexras2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dexras2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal Dexras2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dexras2 Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR Dexras2 (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.