Plásmido Doble Nickase (h) DEPDC5: sc-402806-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DEPDC5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DEPDC5 (h) y el plásmido de doble nickasa DEPDC5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DEPDC5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DEPDC5 | sc-402806-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DEPDC5 | sc-402806-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DEPDC5 (DEP domain containing 5) codifica un componente central del complejo GATOR1, un regulador negativo de la señalización de mTORC1 aguas abajo de la detección de aminoácidos en la superficie lisosomal. Al actuar como un factor activador de GTPasa (GAP) sobre las GTPasas Rag, DEPDC5 ayuda a limitar la actividad de mTORC1 impulsada por nutrientes, influyendo así en la autofagia, la síntesis de proteínas y el control del crecimiento celular. La alteración de DEPDC5 se ha vinculado con una señalización desregulada de la vía de mTOR y una excitabilidad neuronal modificada, con asociaciones genéticas descritas en epilepsias focales y malformaciones corticales. Estas propiedades hacen de DEPDC5 una diana útil para estudios mecanísticos sobre la regulación de mTORC1, la comunicación cruzada de la señalización metabólica y la alteración de vías del neurodesarrollo.
DEPDC5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DEPDC5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DEPDC5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DEPDC5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DEPDC5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.