Particules Lentivirales d'Activation (h) DEK: sc-402862-LAC

DEK code une phosphoprotéine conservée associée à la chromatine, qui module l’architecture de la chromatine à un niveau d’organisation supérieur, influence la topologie des nucléosomes et participe au contrôle de la transcription, à la maturation de l’ARN et à la réplication de l’ADN. Elle est recrutée sur les sites de lésions de l’ADN et contribue à la stabilité du génome en influençant le choix des voies de réparation, les réponses au stress de réplication et la progression du cycle cellulaire. Par ces activités, DEK s’inscrit à l’interface de voies régissant le remodelage de la chromatine, la signalisation des dommages à l’ADN et les programmes transcriptionnels inflammatoires. Une expression altérée de DEK et un dysfonctionnement de la chromatine ont été associés à des phénotypes de prolifération et d’adaptation au stress, pertinents pour l’oncologie et les modèles de maladies à médiation immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales DEK (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de DEK dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales DEK (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription DEK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de DEK. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif DEK ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.