DEDD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423450

Übersicht

Dedd kodiert das Death-Effector-Domänen-enthaltende DNA-bindende Protein DEDD, einen Regulator der Apoptose und von Transkriptionsprogrammen, die mit der Caspase-Signalübertragung verknüpft sind. Berichten zufolge assoziiert DEDD mit dem Nukleolus und dem Chromatin und verbindet dadurch Death-Receptor-Signalwege mit nachgeschalteten Ausführungsmechanismen sowie mit der zellzyklusabhängigen Kontrolle der Genexpression. In Mausmodellen kann eine Störung von Dedd das Gleichgewicht zwischen Überleben und programmiertem Zelltod beeinflussen – Prozesse, die für die Immunhomöostase und den Gewebeumbau zentral sind. Eine fehlregulierte Apoptose und Stressantwort-Signalgebung unter Beteiligung von DEDD ist für Studien zu entzündlichen Erkrankungen, Neurodegeneration und Krebsbiologie relevant, bei denen veränderte Zellschicksalsentscheidungen zu Krankheitsphänotypen beitragen.

Das DEDD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dedd-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dedd-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dedd nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DEDD-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dedd-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DEDD-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dedd-Exone abzielen, die für die DEDD-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dedd-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DEDD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DEDD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dedd-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DEDD HDR-Plasmid (m) und DEDD HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dedd-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dedd-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.