DEDD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423450

Panoramica

Dedd codifica la proteina DEDD, legante il DNA e contenente un dominio death effector, un regolatore dell’apoptosi e di programmi trascrizionali collegati alla segnalazione delle caspasi. È stato riportato che DEDD si associa al nucleolo e alla cromatina, collegando le vie dei recettori di morte ai meccanismi esecutivi a valle e al controllo, associato al ciclo cellulare, dell’espressione genica. Nei modelli murini, l’alterazione di Dedd può influenzare l’equilibrio tra sopravvivenza e morte cellulare programmata, processi centrali per l’omeostasi immunitaria e il rimodellamento tissutale. L’apoptosi disregolata e la segnalazione di risposta allo stress che coinvolge DEDD sono rilevanti per studi su disturbi infiammatori, neurodegenerazione e biologia del cancro, in cui decisioni alterate sul destino cellulare contribuiscono ai fenotipi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DEDD (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dedd in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dedd insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dedd a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DEDD.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dedd per lo studio della segnalazione di DEDD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dedd critici per la funzione di DEDD
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dedd per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DEDD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DEDD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dedd. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DEDD Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DEDD (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dedd per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dedd definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.