DDX60L CRISPR Activation Plasmid (h): sc-413888-ACT

DDX60L (DEAD-Box-Helikase 60-like) ist eine humane RNA-Helikase, die an der angeborenen antiviralen Abwehr beteiligt ist und bei der zytosolischen RNA-Erkennung sowie in durch Interferon stimulierten Genprogrammen wirkt. Sie steht mit der Regulation des RNA-Stoffwechsels und den Signalwegen der RIG-I-ähnlichen Rezeptoren in Zusammenhang, die Typ-I-Interferonantworten und nachgeschaltete transkriptionelle Netzwerke prägen. Als interferoninduzierbarer Faktor wird DDX60L häufig im Kontext von Wirt-Pathogen-Interaktionen und inflammatorischer Signalgebung untersucht. Fehlregulierte Interferon- und RNA-Sensing-Signalwege sind für die Infektionsbiologie und immunvermittelte Krankheitsmechanismen relevant und stützen die Untersuchung der DDX60L-abhängigen Kontrolle von Virusreplikation und Zytokinantworten.

DDX60L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DDX60L-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DDX60L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DDX60L-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DDX60L-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DDX60L-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DDX60L-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DDX60L-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DDX60L-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DDX60L-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.