DDX3X CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401253-ACT

DDX3X kodiert eine konservierte DEAD-Box-RNA-Helikase, die RNA-Sekundärstrukturen und Ribonukleoprotein-Komplexe umbaut, um mehrere Schritte des RNA-Stoffwechsels zu koordinieren, darunter die transkriptionelle Regulation, die Verarbeitung von Prä‑mRNA, den mRNA-Export, die Initiation der Translation sowie die Dynamik von Stressgranula. In menschlichen Zellen integriert DDX3X Signale, die angeborene Immunantworten und zelluläre Stressprogramme prägen, und verknüpft damit RNA-Erkennung mit interferonassoziierten Signalwegen und der Kontrolle der Translation. Eine veränderte DDX3X-Aktivität oder -Expression wurde mit dysregulierter Proliferation, aberranten Stressantworten und Defekten der Genomstabilität in Verbindung gebracht, wodurch DDX3X für mechanistische Studien der Krebsbiologie und neuroentwicklungsbezogener Erkrankungen relevant ist. Als multifunktionale RNA-Helikase wird DDX3X häufig als zentraler Knotenpunkt genutzt, um posttranskriptionelle Genregulation und das Zusammenspiel von Signalwegen zu untersuchen.

DDX3X Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DDX3X-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DDX3X Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DDX3X-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DDX3X-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DDX3X-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DDX3X-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DDX3X-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DDX3X-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DDX3X-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.