DDX32 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430371

Descripción general

Dhx32 codifica la proteína DDX32 de ratón, una presunta helicasa de ARN dependiente de ATP de la familia DEAD-box, implicada en la remodelación, impulsada por ATP, de la estructura secundaria del ARN y de los complejos ribonucleoproteicos. Las proteínas de esta clase suelen regular procesos centrales del metabolismo del ARN, como el empalme (splicing) del pre-ARNm, el transporte de ARN, la biogénesis de ribosomas y la traducción, vinculando la actividad de DDX32 al control de programas de expresión génica. La alteración de la función de helicasas de ARN puede perturbar la regulación del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas transcripcionales adaptativas al estrés, lo que convierte a Dhx32 en un locus útil para estudiar vías de procesamiento de ARN en el desarrollo y en fenotipos celulares relevantes para enfermedades. En sistemas murinos, el estudio de Dhx32 permite realizar análisis mecanísticos que conectan el metabolismo del ARN con redes de señalización y con relaciones genotipo–fenotipo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DDX32 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dhx32 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dhx32 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dhx32 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DDX32.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dhx32 para la investigación de la señalización de DDX32, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dhx32 críticos para la función de DDX32
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dhx32 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DDX32 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DDX32 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dhx32. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DDX32 (m) y el plásmido HDR DDX32 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dhx32 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dhx32 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.