DDX11 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418103

Descripción general

DDX11 (helicasa 11 de la familia DEAD/H-box), también conocida como ChlR1, es una helicasa de ADN que favorece la estabilidad del genoma al promover la cohesión entre cromátidas hermanas y una replicación del ADN eficiente. Participa en la reparación del ADN acoplada a la replicación y en la progresión de la horquilla de replicación, intersectando con el establecimiento de la cohesión y con vías más amplias de respuesta al daño del ADN. La actividad de DDX11 ayuda a prevenir la rotura cromosómica y la aneuploidía asociadas al estrés replicativo, vinculando su función con mecanismos que protegen la segregación cromosómica. La alteración genética o la disfunción de DDX11 se asocia con fenotipos de inestabilidad genómica relacionados con cohesina, incluido el síndrome de rotura de Varsovia, lo que la hace relevante para estudiar defectos de cohesión y daño del ADN asociado a la replicación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DDX11 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DDX11 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DDX11 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DDX11 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DDX11.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DDX11 para la investigación de la señalización de DDX11, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DDX11 críticos para la función de DDX11
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DDX11 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DDX11 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DDX11 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DDX11. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DDX11 (h) y el plásmido HDR DDX11 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DDX11 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DDX11 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.