Plasmide CRISPR/Cas9 KO DDI1 (h): sc-416011

Présentation

DDI1 (DNA damage inducible 1 homolog) code une protéine conservée au cours de l’évolution, impliquée dans la protéostasie et les réponses au stress, et présentant une homologie avec des domaines de type ubiquitine et des domaines de protéase rétrovirale. Dans les cellules humaines, DDI1 a été associée à des processus dépendants de l’ubiquitine qui influencent le renouvellement des protéines et l’adaptation cellulaire au stress génotoxique, contribuant ainsi au maintien de l’intégrité du génome. À travers ces fonctions, DDI1 est étudiée dans des voies reliant la signalisation des dommages à l’ADN, le stress associé à la réplication et la dégradation régulée de protéines mal repliées ou endommagées. La dérégulation de la protéostasie et des circuits de réponse au stress est fréquemment examinée dans le contexte de la transformation oncogénique et de phénotypes neurodégénératifs, ce qui fait de DDI1 une cible utile pour la recherche mécanistique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DDI1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DDI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DDI1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DDI1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DDI1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DDI1 pour l'étude de la signalisation de DDI1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DDI1 essentiels à la fonction de DDI1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DDI1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DDI1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DDI1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DDI1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DDI1 plasmide HDR (h) et le DDI1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DDI1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DDI1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.