DcpS Plasmide Double Nickase (m): sc-427369-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DcpS Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DcpS Double Nickase Plasmid (m) e il DcpS Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Dcps. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DcpS Antibody (A-12): sc-393226
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DcpS Plasmide Double Nickase (m) | sc-427369-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene **Dcps** del topo codifica per l’enzima di decapping “scavenger” **DcpS**, un’idrolasi citosolica della famiglia HIT che scinde le strutture cap residue (m7GpppN) generate durante la degradazione dell’mRNA in direzione 3′→5′. Idrolizzando i dinucleotidi cap, DcpS favorisce il turnover dell’mRNA e il recupero dei nucleotidi, e previene l’accumulo di derivati del cap che possono perturbare il metabolismo dell’RNA. La funzione di DcpS si inserisce in vie più ampie di sorveglianza e degradazione dell’RNA, in complementarità con il decapping citoplasmatico e con i processi mediati dall’esosoma. Alterazioni nella maturazione dell’RNA e nei meccanismi di controllo qualità sono rilevanti per la biologia delle malattie neuroevolutive e neurodegenerative, nonché per stati proliferativi in cui l’omeostasi del trascrittoma viene rimodellata.
DcpS Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dcps nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dcps. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dcps. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dcps interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.