DC-SIGNR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404217-ACT

Humanes **CLEC4M** kodiert **DC-SIGNR**, einen C‑Typ-Lektinrezeptor, der vor allem auf Endothelzellen angereichert ist und hochmannosehaltige sowie fukosylierte Glykane erkennt, um eine Ca2+-abhängige Kohlenhydratbindung zu vermitteln. Über Ligandenbindung und Adhäsionsfunktionen beeinflusst DC-SIGNR Zell‑Zell‑Interaktionen sowie die Erkennung von Pathogenen an mukosalen und vaskulären Grenzflächen, mit nachgeschalteten Effekten auf endozytotischen Transport und die angeborene Immun-Signalübertragung. Die Aktivität von CLEC4M greift in glykanabhängige Erkennungsprozesse ein, die Antigenverarbeitung, Entzündungsreaktionen und das Anheften von Leukozyten mitprägen. Genetische und expressionsbedingte Variabilität von CLEC4M wurde in Zusammenhängen untersucht, die die Anfälligkeit für Infektionskrankheiten und immunbezogene Phänotypen betreffen, was seine Relevanz als Modulator von Wirt‑Pathogen‑ und Wirt‑Mikroben‑Interaktionen unterstreicht.

DC-SIGNR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CLEC4M-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DC-SIGNR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CLEC4M-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CLEC4M-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DC-SIGNR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CLEC4M-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DC-SIGNR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DC-SIGNR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CLEC4M-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.