DBC-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403056-ACT

CCAR2 codifica o Deleted in Breast Cancer 1 (DBC-1), uma proteína reguladora nuclear que modula programas de transcrição ao interagir com fatores associados à cromatina e sensores metabólicos. O DBC-1 influencia a sinalização dependente de acetilação por meio da regulação da atividade de sirtuínas e coopera com receptores nucleares e co-reguladores transcricionais para moldar o controle do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a expressão de genes relacionados à apoptose. Por meio dessas funções, o CCAR2/DBC-1 está ligado a vias que governam a estabilidade do genoma e a adaptação ao estresse, tornando-o relevante para estudos de reprogramação transcricional associada a tumores e de senescência celular. Alterações na expressão de CCAR2 ou nas redes de interação do DBC-1 foram relatadas em múltiplos contextos de câncer e também são de interesse para investigar a comunicação cruzada metabólico-epigenética em células humanas.

DBC-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCAR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DBC-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCAR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCAR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DBC-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCAR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DBC-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DBC-1 em células tumorais com expressão de CCAR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.