Plasmide Double Nickase (h) DAP-5: sc-405901-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DAP-5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DAP-5 Double Nickase (h) et le plasmide DAP-5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF4G2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DAP-5 Antibody (F-2): sc-137011
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DAP-5 | sc-405901-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DAP-5 | sc-405901-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4G2 code pour DAP-5 (également appelé eIF4G2/NAT1), une protéine d’échafaudage non canonique de l’initiation de la traduction qui soutient la traduction des ARNm indépendante de la coiffe et dépendante des IRES, en particulier lorsque l’activité d’eIF4F est limitée. DAP-5 contribue au contrôle translationnel lors des réponses au stress cellulaire, de l’apoptose et de la différenciation en coordonnant les interactions avec les facteurs d’initiation et le recrutement sélectif d’ARNm. Par ces mécanismes, EIF4G2 influence la protéostasie et des programmes de signalisation qui remodèlent l’expression génique au niveau de la traduction. Une dérégulation de la reprogrammation translationnelle liée à EIF4G2 a été étudiée dans des contextes tels que la survie des cellules tumorales, les processus du neurodéveloppement et les phénotypes d’adaptation au stress, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation des ARN.
DAP-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF4G2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF4G2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF4G2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF4G2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.