Plasmide Double Nickase (h) DAGLα: sc-402826-NIC

DAGLA code la lipase diacylglycérol alpha (DAGLα), une hydrolase à sérine associée à la membrane qui catalyse la formation de l’endocannabinoïde 2‑arachidonoylglycérol (2‑AG) à partir du diacylglycérol. En contrôlant la disponibilité du 2‑AG, DAGLα régule la signalisation des récepteurs cannabinoïdes et la plasticité synaptique, reliant le métabolisme des phospholipides aux réseaux de signalisation neuromodulatrice. L’activité de DAGLα s’inscrit à l’interface de voies de seconds messagers lipidiques, notamment le renouvellement du diacylglycérol dépendant de la PLC, ainsi que l’équilibre en aval entre eicosanoïdes et endocannabinoïdes. Une dérégulation de la signalisation endocannabinoïde et de l’homéostasie lipidique impliquant DAGLA a été étudiée dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ainsi que plus largement en biologie métabolique et inflammatoire.

DAGLα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DAGLA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DAGLA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DAGLA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DAGLA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.