Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Dab1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402167-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Dab1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Dab1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Dab1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DAB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Dab1: sc-271136
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dab1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402167-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dab1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402167-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DAB1 kodiert Disabled-1 (Dab1), ein intrazelluläres Adapterprotein, das Signale des Reelin-Signalwegs weiterleitet, um während der menschlichen Gehirnentwicklung die neuronale Migration, die Schichtung der Großhirnrinde (kortikale Laminierung) und das Neuritenauswachsen zu koordinieren. Nach der Rezeptorbindung wird Dab1 an Tyrosinresten phosphoryliert und dient als Gerüstprotein für nachgeschaltete Effektoren in Prozessen der Src-Familien-Kinasen, des PI3K–AKT-Signalwegs sowie des zytoskelettalen Umbaus, die Zellpositionierung und Polarität regulieren. Die DAB1-Aktivität greift zudem in endozytotischen Transport und die Dynamik von Mikrotubuli und Aktin ein und verknüpft extrazelluläre Signale mit Veränderungen von Adhäsion und Motilität. Eine Fehlregulation der Reelin–DAB1-Signalkaskade wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch DAB1 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur Bildung neuronaler Schaltkreise darstellt.
Dab1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DAB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DAB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DAB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DAB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.