Dab1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402167-NIC

DAB1 codifica Disabled-1 (Dab1), una proteina adattatrice intracellulare che trasmette i segnali della via di Reelin per coordinare la migrazione neuronale, la laminazione corticale e la crescita dei neuriti durante lo sviluppo del cervello umano. In seguito all’attivazione dei recettori, Dab1 va incontro a fosforilazione su tirosina e funge da piattaforma di assemblaggio per effettori a valle coinvolti nelle chinasi della famiglia Src, nella via PI3K–AKT e nei processi di rimodellamento del citoscheletro che regolano il posizionamento e la polarità cellulare. L’attività di DAB1 interseca il traffico endocitico e la dinamica di microtubuli/actina, collegando segnali extracellulari a cambiamenti di adesione e motilità. La disregolazione del segnale Reelin–DAB1 è stata associata a fenotipi neurosviluppativi e neuropsichiatrici, rendendo DAB1 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla formazione dei circuiti neuronali.

Dab1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DAB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DAB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DAB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DAB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.