Plasmide CRISPR d'Activation (m) D930020B18Rik: sc-432083-ACT

D930020B18Rik code une protéine murine dont la caractérisation reste incomplète, et les annotations disponibles suggèrent un rôle dans l’homéostasie cellulaire fondamentale plutôt que dans un module de signalisation dédié et bien cartographié. En tant que locus exprimé, il est fréquemment pris en compte dans les études transcriptomiques et de génomique fonctionnelle, où la modulation de gènes peu annotés peut révéler des contributions à la régulation transcriptionnelle, au traitement des ARN ou au renouvellement des protéines. Une expression altérée d’ADNc RIKEN non caractérisés est couramment observée comme caractéristique secondaire dans des contextes pertinents pour la maladie, tels que la prolifération, la différenciation et les réponses au stress cellulaire, ce qui soutient son utilisation comme cible de découverte. L’étude de D930020B18Rik peut aider à affiner les modèles de réseaux de gènes et à identifier des liens entre voies via le profilage phénotypique et l’intégration multi-omique.

D930020B18Rik Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de D930020B18Rik sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

D930020B18Rik Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus D930020B18Rik dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription D930020B18Rik, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de D930020B18Rik. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus D930020B18Rik natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de D930020B18Rik au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie D930020B18Rik dans les cellules tumorales présentant une expression de D930020B18Rik silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.