Plásmido Doble Nickase (h) D5DR: sc-404047-NIC

DRD5 codifica el receptor de dopamina D5 (D5DR), un receptor acoplado a proteína G que se acopla predominantemente a Gs/olf para estimular la adenilato ciclasa, aumentar el AMPc y activar la señalización dependiente de PKA. La señalización de D5DR se interseca con la transmisión sináptica regulada por dopamina, la excitabilidad neuronal y la modulación de vías aguas abajo, incluidos programas de transcripción mediados por CREB. En el cerebro y en tejidos periféricos, DRD5 contribuye a la regulación de la función de los circuitos neuronales y de la homeostasis vascular/renal mediante señalización por AMPc y la interacción cruzada del receptor con otras vías de GPCR y canales iónicos. La señalización dopaminérgica desregulada que involucra a DRD5 se ha investigado en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos y de la regulación de la presión arterial, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la biología de la vía dopaminérgica.

D5DR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DRD5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DRD5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DRD5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DRD5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.