Plasmide CRISPR d'Activation (h) D54: sc-407162-ACT

Le gène humain TPD52L2 code D54, un membre de la famille des protéines tumorales de type D52, impliquée dans le trafic vésiculaire, la dynamique membranaire et la régulation des programmes de prolifération et de survie cellulaires. D54 a été associé à des processus sécrétoires et endocytiques pouvant influencer le recyclage des récepteurs et les sorties de signalisation intracellulaire, en interaction avec des voies qui coordonnent les réponses de croissance et de stress. Une expression altérée de TPD52L2 a été rapportée dans de multiples contextes de cancers et de maladies prolifératives, ce qui étaye son utilité comme levier moléculaire pour étudier des transitions d’état cellulaire dérégulées. En recherche fondamentale, D54 est utilisée pour sonder les mécanismes de transport intracellulaire couplés à la signalisation oncogénique et à l’adaptation métabolique.

D54 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TPD52L2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

D54 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TPD52L2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TPD52L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de D54. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TPD52L2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de D54 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie D54 dans les cellules tumorales présentant une expression de TPD52L2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.