Plasmide CRISPR/Cas9 KO D53 (m): sc-423478

Présentation

Tpd52l1 code D53, une protéine cytosolique de la famille des protéines tumorales de type D52, associée à la régulation du trafic membranaire, de la dynamique des vésicules et de l’organisation du cytosquelette. Dans les cellules de souris, D53 est liée à des processus qui coordonnent la sécrétion, la polarité cellulaire et la prolifération, et il a été rapporté qu’elle interagit avec des programmes de signalisation qui façonnent le comportement des cellules épithéliales et stromales. Une expression altérée des membres de la famille D52 a été observée dans des contextes de transformation oncogénique et de contrôle anormal de la croissance, faisant de Tpd52l1 une cible utile pour disséquer les mécanismes de progression du cycle cellulaire, de migration et de remodelage adaptatif au stress. La perturbation génétique de Tpd52l1 permet d’étudier la connectivité des voies entre la machinerie de trafic, la signalisation mitogène et des phénotypes pertinents pour la biologie tumorale et l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO D53 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tpd52l1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tpd52l1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tpd52l1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine D53.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tpd52l1 pour l'étude de la signalisation de D53, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tpd52l1 essentiels à la fonction de D53
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tpd52l1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le D53 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le D53 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tpd52l1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le D53 plasmide HDR (m) et le D53 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tpd52l1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tpd52l1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.