Plásmido CRISPR de Activación (h) CYYR1: sc-404421-ACT

El CYYR1 humano (proteína 1 rica en cisteína y tirosina) codifica una proteína pequeña, de baja complejidad y enriquecida en cisteína/tirosina, implicada en la regulación de la señalización celular y de programas transcripcionales adaptativos al estrés. Se ha descrito que la expresión de CYYR1 responde a estímulos inflamatorios y al estrés celular, lo que sugiere un papel en la coordinación del crosstalk entre vías que influye en la organización del citoesqueleto, la señalización asociada a la adhesión y la expresión génica dependiente del contexto. Como posible modulador de respuestas transcripcionales inducidas por estímulos, CYYR1 resulta de interés para dilucidar mecanismos que acoplan señales extracelulares a redes reguladoras aguas abajo. Se ha observado una expresión desregulada de CYYR1 en perfiles de expresión asociados a enfermedades, lo que respalda su utilidad como diana de investigación en estudios de fenotipos vinculados a la inflamación y de estados de señalización asociados a tumores.

CYYR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYYR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYYR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYYR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYYR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYYR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYYR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYYR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYYR1 en células tumorales con expresión de CYYR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.