Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
cystatin SN Plasmide Double Nickase (h): sc-405440-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cystatin SN Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cystatin SN Double Nickase Plasmid (h) e il cystatin SN Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CST1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cystatin SN Antibody (SN21): sc-73885
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cystatin SN Plasmide Double Nickase (h) | sc-405440-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cystatin SN Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405440-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CST1 codifica la cistatina SN, una cistatina di tipo 2 secreta che inibisce le proteasi cisteiniche di tipo papaina, come le catepsine, modulando così la proteolisi extracellulare e pericellulare. Limitando l’attività delle catepsine, la cistatina SN contribuisce alla regolazione dell’omeostasi della barriera epiteliale, della segnalazione infiammatoria e del rimodellamento dell’ambiente tissutale dipendente dalle proteasi. Un’alterata espressione di CST1 è stata riportata in diverse patologie epiteliali e nei tumori, dove uno squilibrio tra attività proteasica e antiproteasica può influenzare i processi legati all’invasione e le interazioni con le cellule immunitarie. Di conseguenza, CST1 viene spesso studiato in percorsi che collegano il controllo della proteolisi alla biologia delle mucose, al rimodellamento associato ai tumori e alle risposte ospite–microbo.
cystatin SN Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CST1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CST1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CST1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CST1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.