Plásmido Doble Nickase (h) cystatin SN: sc-405440-NIC

CST1 codifica la cistatina SN, una cistatina tipo 2 secretada que inhibe proteasas de cisteína tipo papaína, como las catepsinas, modulando así la proteólisis extracelular y pericelular. Al restringir la actividad de las catepsinas, la cistatina SN contribuye a la regulación de la homeostasis de la barrera epitelial, la señalización inflamatoria y la remodelación del microambiente tisular dependiente de proteasas. Se han descrito alteraciones en la expresión de CST1 en varias patologías epiteliales y cánceres, donde un desequilibrio en la actividad proteasa–antiproteasa puede influir en procesos relacionados con la invasión y en las interacciones con células inmunitarias. Como resultado, CST1 se estudia con frecuencia en vías que conectan el control proteolítico con la biología mucosa, la remodelación asociada a tumores y las respuestas del hospedador frente a microorganismos.

cystatin SN El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CST1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CST1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CST1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CST1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.