Plasmide CRISPR d'Activation (h) cystatin S: sc-416501-ACT

CST4 code la cystatine S, une cystatine de type 2 sécrétée qui agit comme inhibiteur réversible des protéases cystéines de type papaïne, telles que les cathepsines, contribuant ainsi à la régulation de la protéolyse extracellulaire et des voies de signalisation dépendantes des protéases. Elle est fortement exprimée dans la salive et d’autres sécrétions des muqueuses, où elle participe à l’homéostasie des surfaces épithéliales en modulant la dégradation des protéines, des peptides et des composants de la matrice. En façonnant l’équilibre entre les protéases et leurs inhibiteurs endogènes, la cystatine S influence des processus liés à l’inflammation, à l’intégrité de la barrière et à l’écologie microbienne aux interfaces muqueuses. Une activité cystatine–cathepsine dérégulée a été étudiée dans des contextes incluant des affections inflammatoires buccales et des voies aériennes, ainsi que le remodelage tissulaire associé aux protéases, faisant de CST4 une cible utile pour la recherche mécanistique sur les réseaux protéolytiques.

cystatin S Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CST4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cystatin S Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CST4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CST4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cystatin S. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CST4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cystatin S au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cystatin S dans les cellules tumorales présentant une expression de CST4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.