Plasmide Double Nickase (h) CYPOR: sc-402375-NIC

Le gène humain **POR** code la **cytochrome P450 oxydoréductase (CYPOR)**, une flavoprotéine essentielle qui transfère des électrons du **NADPH** vers les enzymes **cytochromes P450 microsomales** dans le réticulum endoplasmique. Cette activité soutient le métabolisme des xénobiotiques, la biosynthèse des hormones stéroïdiennes, l’oxydation des acides gras et, plus largement, l’homéostasie redox en permettant des réactions de monooxygénation dépendantes des CYP. La fonction de POR s’inscrit donc à l’interface des voies du métabolisme des médicaments et des réseaux endocriniens de stéroïdogenèse qui influencent les réponses cellulaires au stress et les phénotypes métaboliques. Des perturbations génétiques ou fonctionnelles de POR sont pertinentes pour les troubles de la stéroïdogenèse et les réponses pharmacogénomiques variables, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles cellulaires de type hépatocytaire et des cellules stéroïdogènes.

CYPOR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus POR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de POR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de POR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de POR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.