Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP8B1: sc-403383-ACT

Le gène humain **CYP8B1** code la stérol 12α‑hydroxylase, une enzyme microsomale du cytochrome P450 qui détermine la composition des acides biliaires en catalysant une étape clé d’hydroxylation nécessaire à la synthèse de l’acide cholique. Par son rôle dans la voie classique de biosynthèse des acides biliaires, **CYP8B1** influence le rapport acide cholique/acide chénodésoxycholique, modulant ainsi le renouvellement du cholestérol hépatique, l’absorption intestinale des lipides et la signalisation médiée par les acides biliaires. L’activité de **CYP8B1** est fonctionnellement liée à l’homéostasie métabolique via un dialogue avec des voies de récepteurs nucléaires telles que **FXR** et des programmes transcriptionnels associés, qui régissent le transport des acides biliaires et la régulation par rétrocontrôle. Une expression altérée de **CYP8B1** ou des profils d’acides biliaires modifiés ont été associés à la dyslipidémie, à l’insulinorésistance, à la stéatose hépatique non alcoolique et à des phénotypes hépatiques cholestatiques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du métabolisme hépatobiliaire.

CYP8B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP8B1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP8B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP8B1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP8B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP8B1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP8B1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP8B1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP8B1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP8B1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.