Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP7A1: sc-401001-ACT

Le gène humain **CYP7A1** code la cholestérol 7α-hydroxylase, une enzyme du cytochrome P450 fortement exprimée dans le foie, qui catalyse la première étape — et l’étape limitante — de la voie classique de synthèse des acides biliaires à partir du cholestérol. En contrôlant la conversion du cholestérol en acides biliaires primaires, **CYP7A1** influence l’homéostasie du cholestérol, la signalisation entérohépatique et la régulation par rétrocontrôle via des récepteurs nucléaires tels que **FXR**, ainsi que les programmes géniques métaboliques en aval. Une activité altérée de **CYP7A1** a été associée à une dérégulation des pools d’acides biliaires, à une susceptibilité à l’hypercholestérolémie et à des phénotypes métaboliques affectant l’absorption des lipides et la gestion des lipides hépatiques. En tant que nœud central du métabolisme des stérols et des acides biliaires, **CYP7A1** est largement étudié en biologie des hépatocytes, en régulation métabolique et dans les interactions entre voies de signalisation, notamment avec l’inflammation et les réponses aux xénobiotiques.

CYP7A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP7A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP7A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP7A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP7A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP7A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP7A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP7A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP7A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP7A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.