Plásmido Doble Nickase (h) CYP3A4: sc-416463-NIC

CYP3A4 codifica una monooxigenasa del citocromo P450 con hemo-tiolato que cataliza el metabolismo oxidativo de una amplia variedad de xenobióticos y sustratos endógenos, incluidos esteroides, ácidos biliares y ácidos grasos. Funciona principalmente en el retículo endoplásmico y se integra en las redes hepáticas e intestinales de metabolismo de fármacos, coordinando la biotransformación de fase I con vías posteriores de desintoxicación y transporte. La actividad de CYP3A4 está regulada por la señalización de receptores nucleares, incluidos PXR y CAR, lo que vincula programas transcripcionales sensibles a la exposición con la capacidad metabólica. La variación interindividual en la expresión o la función de CYP3A4 es un determinante principal de las interacciones fármaco–fármaco y de fenotipos metabólicos alterados, estudiados en contextos de enfermedad hepática, inflamación y reprogramación metabólica asociada al cáncer.

CYP3A4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYP3A4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYP3A4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYP3A4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYP3A4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.