Plasmide CRISPR d'Activation (m) Cyp3a11: sc-419922-ACT

Le gène murin Cyp3a11 code une monooxygénase du cytochrome P450 qui catalyse le métabolisme oxydatif des xénobiotiques et de substrats endogènes, contribuant à la clairance hépatique et à l’homéostasie chimique. L’activité de Cyp3a11 participe au métabolisme des médicaments de phase I et s’articule avec des voies de signalisation des récepteurs nucléaires, notamment PXR et CAR, qui coordonnent les réponses transcriptionnelles à l’exposition et à l’état métabolique. En modulant la biotransformation des composés et des stéroïdes, Cyp3a11 influence la variabilité pharmacocinétique et la susceptibilité aux lésions hépatotoxiques en contexte de stress métabolique ou inflammatoire. Une régulation altérée de Cyp3a11 est donc pertinente pour les études sur les interactions médicamenteuses, la fonction hépatique et les mécanismes gène–environnement qui affectent les phénotypes toxicologiques dans des modèles murins.

Cyp3a11 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cyp3a11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cyp3a11 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cyp3a11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cyp3a11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cyp3a11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cyp3a11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cyp3a11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cyp3a11 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cyp3a11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.