CYP2C9 Double Nickase Plasmid (h): sc-403593-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP2C9 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP2C9 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP2C9 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP2C9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP2C9 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403593-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP2C9 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403593-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP2C9 kodiert eine Häm-Thiolat-Cytochrom-P450-Monooxygenase, die im endoplasmatischen Retikulum die oxidative Biotransformation vielfältiger Xenobiotika und endogener Substrate katalysiert. Als Bestandteil des Phase-I-Stoffwechsels trägt CYP2C9 über die NADPH–Cytochrom-P450-Reduktase zum redoxabhängigen Elektronentransfer bei und beeinflusst damit die zelluläre Exposition gegenüber reaktiven Zwischenprodukten sowie nachgeschaltete Konjugationswege. Genetische Polymorphismen und eine veränderte hepatische Expression von CYP2C9 sind mit interindividuellen Unterschieden in der Arzneistoff-Clearance und der Anfälligkeit für unerwünschte Arzneimittelwirkungen verbunden, was das Gen zu einem zentralen Lokus der Pharmakogenomik macht. Eine dysregulierte CYP2C9-Aktivität wird zudem im Zusammenhang mit Mechanismen der Leberschädigung und dem Remodeling von Entgiftungsnetzwerken auf Signalwegebene untersucht.
CYP2C9 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP2C9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP2C9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP2C9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP2C9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.