Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2A13 (h): sc-403450

Présentation

CYP2A13 code une monooxygénase humaine du cytochrome P450, impliquée principalement dans le métabolisme oxydatif des xénobiotiques et de substrats endogènes. En tant que composant du réseau d’enzymes de métabolisation des médicaments de phase I, CYP2A13 contribue au transfert d’électrons dépendant du NADPH avec la réductase du cytochrome P450 et catalyse des réactions qui influencent l’équilibre rédox cellulaire ainsi que la formation de métabolites réactifs. Le gène est fortement exprimé dans les tissus des voies respiratoires et est impliqué dans la bioactivation et la détoxification de composés inhalés, reliant son activité à des voies pertinentes pour les réponses au stress de l’épithélium pulmonaire. Des variations de l’expression ou de l’activité de CYP2A13 ont été associées à des différences interindividuelles dans la prise en charge des xénobiotiques et la susceptibilité aux lésions tissulaires induites par des substances chimiques, ce qui soutient son intérêt dans les modèles de recherche en toxicologie et en carcinogenèse.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2A13 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CYP2A13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CYP2A13, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CYP2A13 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYP2A13.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CYP2A13 pour l'étude de la signalisation de CYP2A13, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CYP2A13 essentiels à la fonction de CYP2A13
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CYP2A13 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYP2A13 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CYP2A13 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CYP2A13. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYP2A13 plasmide HDR (h) et le CYP2A13 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CYP2A13 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CYP2A13 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.