Plasmide Double Nickase (h) CYP27A1: sc-402836-NIC

Le gène humain **CYP27A1** code la **stérol 27‑hydroxylase**, une enzyme mitochondriale de la famille des cytochromes P450 qui catalyse l’oxydation du cholestérol et d’intermédiaires stéroliques au cours de la biosynthèse des acides biliaires. En générant des stérols 27‑hydroxylés, CYP27A1 soutient le catabolisme mitochondrial des stérols, contribue à l’homéostasie lipidique et s’inscrit à l’interface des voies hépatiques des acides biliaires, du transport du cholestérol et de la signalisation par les oxystérols. Une activité altérée de CYP27A1 modifie la composition en stérols et en acides biliaires et a été associée à des erreurs innées du métabolisme des acides biliaires, telles que la xanthomatose cérébrotendineuse, avec des effets en aval sur le dépôt de cholestérol et la gestion tissulaire des stérols. CYP27A1 est donc largement étudié en biologie du métabolisme, pour la fonction des P450 mitochondriales et pour la régulation, médiée par les oxystérols, des réseaux de récepteurs nucléaires.

CYP27A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP27A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP27A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP27A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP27A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.