Partículas Lentivirales de Activación (h) CYP21A2: sc-402919-LAC

CYP21A2 codifica la 21-hidroxilasa del citocromo P450, una monooxigenasa asociada al retículo endoplásmico que cataliza pasos clave de 21-hidroxilación en la esteroidogénesis suprarrenal, incluida la conversión de la progesterona y la 17α-hidroxiprogesterona hacia la biosíntesis de mineralocorticoides y glucocorticoides. Esta enzima funciona dentro de la química redox del P450 dependiente de hemo y está integrada con vías hormonales derivadas del colesterol que determinan la zonación suprarrenal, la retroalimentación endocrina y el estado metabólico celular. La alteración de la actividad de CYP21A2 se asocia estrechamente con los fenotipos de hiperplasia suprarrenal congénita y proporciona un punto de entrada molecular para estudiar la acumulación de precursores esteroideos, la producción alterada de cortisol/aldosterona y los efectos de señalización posteriores en modelos celulares relevantes. Dado que CYP21A2 se localiza en una región genómica compleja cerca del pseudogén altamente homólogo CYP21A1P, a menudo es importante interrogar con precisión la regulación específica del locus para estudios mecanísticos.

Las partículas de activación lentiviral CYP21A2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CYP21A2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CYP21A2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CYP21A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CYP21A2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CYP21A2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.