CYP21A2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402919-ACT

CYP21A2 kodiert das Cytochrom P450 21‑Hydroxylase, eine mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziierte Monooxygenase, die für die adrenale Steroidogenese erforderlich ist. Durch die Katalyse von 21‑Hydroxylierungsschritten in der Biosynthese von Cortisol‑ und Aldosteronvorstufen trägt CYP21A2 zur Regulation glukokortikoider und mineralokortikoider Signalwege bei, die den Elektrolythaushalt und die stressabhängige endokrine Signalübertragung prägen. Eine veränderte Expression oder Aktivität von CYP21A2 stört den Steroidhormonfluss durch die Nebennierenrinde und beeinflusst nachgeschaltete Transkriptionsprogramme, die von nukleären Hormonrezeptoren gesteuert werden. Eine Fehlregulation dieses Gens ist eng mit Phänotypen der kongenitalen Nebennierenhyperplasie verknüpft und wird häufig in der endokrinologischen Genetik sowie der Forschung zum Steroidstoffwechsel untersucht.

CYP21A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CYP21A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CYP21A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CYP21A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CYP21A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CYP21A2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CYP21A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CYP21A2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CYP21A2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CYP21A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.