Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP1A2: sc-401178-ACT

CYP1A2 code une monooxygénase du cytochrome P450 enrichie dans le foie, qui catalyse le métabolisme oxydatif de nombreux xénobiotiques et substrats endogènes, notamment les hydrocarbures aromatiques et les méthylxanthines. En tant que composant clé de la biotransformation de phase I, CYP1A2 fonctionne au sein de la chaîne de transfert d’électrons du réticulum endoplasmique et s’intègre aux programmes transcriptionnels régulés par l’AhR, qui coordonnent les réponses de détoxification. La variabilité interindividuelle de l’expression ou de l’activité de CYP1A2 peut modifier la capacité métabolique et l’équilibre du stress oxydant, influençant la susceptibilité à la toxicité induite par des substances chimiques et les phénotypes d’interaction médicament–gène dans des systèmes expérimentaux. Sa régulation est couramment étudiée dans des modèles de différenciation hépatique, de signalisation inflammatoire et d’exposition environnementale, où l’induction transcriptionnelle constitue un critère de lecture principal.

CYP1A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP1A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP1A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP1A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP1A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP1A2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP1A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP1A2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP1A2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP1A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.