Plasmide Double Nickase (m) CYP1A1: sc-419897-NIC

Le gène murin **Cyp1a1** code le cytochrome P450 1A1 (CYP1A1), une monooxygénase microsomale qui catalyse le métabolisme oxydatif des xénobiotiques et de substrats endogènes, notamment la bioactivation et la détoxification des hydrocarbures aromatiques polycycliques. CYP1A1 est un effecteur canonique en aval de la signalisation du récepteur des hydrocarbures aromatiques (AHR), reliant des ligands environnementaux à des programmes transcriptionnels qui régulent le métabolisme de phase I et se coordonnent avec les voies de conjugaison de phase II. Son activité influence l’équilibre rédox cellulaire via la formation de métabolites réactifs et la modulation des réponses au stress oxydant, avec des implications pour la signalisation des dommages à l’ADN et l’inflammation. Une expression ou une activité dérégulée de CYP1A1 est fréquemment utilisée comme biomarqueur d’une perturbation de la voie AHR et est pertinente pour des études sur la susceptibilité aux toxiques, le métabolisme des carcinogènes et l’adaptation métabolique spécifique des tissus.

CYP1A1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cyp1a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cyp1a1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cyp1a1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cyp1a1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.