Plasmide CRISPR d'Activation (m) CYP1A1: sc-419897-ACT

Le gène murin **Cyp1a1** code l’enzyme du cytochrome P450 **CYP1A1**, une monooxygénase hème‑dépendante qui catalyse le métabolisme oxydatif des xénobiotiques et de substrats endogènes. Sa transcription est fortement induite en aval de la signalisation du récepteur des hydrocarbures aromatiques (**AHR**), reliant des ligands environnementaux à la biotransformation de phase I et aux voies de détoxification qui s’ensuivent. L’activité de CYP1A1 influence l’équilibre rédox cellulaire et peut moduler la production d’espèces réactives de l’oxygène au cours du cycle catalytique, en interface avec les programmes de réponse au stress et la signalisation inflammatoire. Une expression ou une activité dérégulée de CYP1A1 a été associée à une susceptibilité chimique modifiée et à des processus impliqués dans la carcinogenèse, ce qui soutient son utilisation en toxicologie, en biologie de l’exposition et dans les études d’interactions gène–environnement.

CYP1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cyp1a1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cyp1a1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cyp1a1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP1A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cyp1a1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP1A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP1A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cyp1a1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.