CYP11B1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403040-ACT

CYP11B1 codiert die Cytochrom‑P450‑11β‑Hydroxylase, eine mitochondriale Monooxygenase, die späte Schritte der Nebennieren‑Steroidogenese katalysiert, darunter die Umwandlung von 11‑Desoxycortisol zu Cortisol und von 11‑Desoxycorticosteron zu Corticosteron. Dieses Enzym wirkt in hämabhängigen Redoxreaktionen, die einen Elektronentransfer über Adrenodoxin/Adrenodoxin‑Reduktase erfordern, und verknüpft damit den mitochondrialen Stoffwechsel mit der hormonellen Produktion. Die Aktivität von CYP11B1 beeinflusst die Regulation der Hypothalamus‑Hypophysen‑Nebennieren‑Achse sowie nachgelagerte, auf Glukokortikoide und Mineralokortikoide reagierende Transkriptionsprogramme. Eine veränderte Expression oder Funktion von CYP11B1 ist mit Phänotypen der kongenitalen Nebennierenhyperplasie assoziiert und trägt zu endokrinen Dysregulationen bei, was für die Modellierung von Nebennierenerkrankungen und steroidgetriebenen Krankheitszuständen relevant ist.

CYP11B1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CYP11B1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CYP11B1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CYP11B1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CYP11B1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CYP11B1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CYP11B1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CYP11B1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CYP11B1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CYP11B1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.