cyclin T1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400623-NIC

CCNT1 codifica la ciclina T1, una subunità regolatoria del complesso P-TEFb che si associa a CDK9 per fosforilare il dominio C‑terminale della RNA polimerasi II e promuovere l’allungamento trascrizionale. Attraverso il controllo del rilascio dalla pausa, la ciclina T1 influenza programmi di espressione genica responsivi agli stimoli, la progressione del ciclo cellulare e reti trascrizionali associate alla differenziazione. L’attività di P-TEFb dipendente da CCNT1 interagisce inoltre con la regolazione della cromatina e con il processamento dell’RNA, collegando la dinamica della trascrizione a circuiti più ampi di regolazione genica. Una segnalazione ciclina T1/CDK9 deregolata è stata implicata in stati trascrizionali oncogenici e in altri disturbi caratterizzati da un controllo trascrizionale alterato, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici di fenotipi dipendenti dalla trascrizione.

cyclin T1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CCNT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CCNT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CCNT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CCNT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.