Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
cyclin T1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400623
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cyclin T1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico cyclin T1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cyclin T1 Antibody (E-3): sc-271348
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cyclin T1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400623 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CCNT1 codifica la ciclina T1, una subunità regolatoria del complesso P-TEFb che si associa a CDK9 per fosforilare l’RNA polimerasi II e promuovere l’allungamento trascrizionale. Attraverso il controllo della pausa prossimale al promotore, la ciclina T1 influenza programmi di espressione legati alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte allo stress e alla differenziazione. L’attività di CCNT1 interseca l’elaborazione dell’RNA accoppiata alla trascrizione e la regolazione associata alla cromatina, modellando la dinamica globale dell’espressione genica. La deregolazione della segnalazione di P-TEFb e del controllo trascrizionale dipendente dalla ciclina T1 è stata implicata in contesti che includono programmi trascrizionali oncogenici e interazioni ospite–patogeno rilevanti per la trascrizione virale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin T1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCNT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCNT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCNT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cyclin T1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCNT1 per lo studio della segnalazione di cyclin T1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CCNT1 critici per la funzione di cyclin T1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCNT1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal cyclin T1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cyclin T1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCNT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal cyclin T1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cyclin T1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCNT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCNT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.