Plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin T1 (h): sc-400623

Présentation

CCNT1 code la cycline T1, une sous-unité régulatrice du complexe P-TEFb qui s’associe à CDK9 pour phosphoryler l’ARN polymérase II et favoriser l’élongation transcriptionnelle. En contrôlant la pause proximale au promoteur, la cycline T1 influence des programmes d’expression liés à la progression du cycle cellulaire, aux réponses au stress et à la différenciation. L’activité de CCNT1 recoupe la maturation de l’ARN couplée à la transcription ainsi que la régulation associée à la chromatine, façonnant la dynamique globale de l’expression génique. Un dérèglement de la signalisation P-TEFb et du contrôle transcriptionnel dépendant de la cycline T1 a été impliqué dans divers contextes, notamment des programmes transcriptionnels oncogéniques et des interactions hôte–pathogène pertinentes pour la transcription virale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin T1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CCNT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CCNT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CCNT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cyclin T1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CCNT1 pour l'étude de la signalisation de cyclin T1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CCNT1 essentiels à la fonction de cyclin T1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CCNT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le cyclin T1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le cyclin T1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CCNT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le cyclin T1 plasmide HDR (h) et le cyclin T1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CCNT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CCNT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.