cyclin T1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400623-ACT

CCNT1 kodiert für Cyclin T1, den regulatorischen Partner von CDK9 im Komplex des positiven Transkriptions‑Elongationsfaktors b (P‑TEFb), der die Freisetzung der Pause der RNA‑Polymerase II stimuliert, indem er die CTD sowie negative Elongationsfaktoren phosphoryliert. Über die Kontrolle der Transkriptionselongation beeinflusst Cyclin T1 den Zellzyklusfortschritt, DNA‑Schadensantworten und Differenzierungsprogramme und ist ein zentraler Wirtsfaktor, den HIV‑1 Tat ausnutzt, um die virale Transkription zu steigern. Eine veränderte P‑TEFb‑Aktivität und die Verfügbarkeit von Cyclin T1 wurden mit fehlregulierten Transkriptionsnetzwerken in der Krebsbiologie und in Kontexten inflammatorischer Signalübertragung in Verbindung gebracht. CCNT1 wird daher häufig in Signalwegen untersucht, die die Transkriptionskontrolle, chromatinassoziierte Regulation und stressresponsive Genexpression steuern.

cyclin T1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CCNT1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

cyclin T1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CCNT1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CCNT1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen cyclin T1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CCNT1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von cyclin T1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des cyclin T1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CCNT1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.