cyclin G1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402045

Panoramica

CCNG1 codifica la ciclina G1, una ciclina atipica rapidamente indotta dallo stress cellulare, che integra i segnali provenienti dalla rete di p53 per modulare la progressione del ciclo cellulare e il controllo dei checkpoint. La ciclina G1 partecipa alla regolazione a feedback dell’attività di p53 tramite complessi associati a fosfatasi, influenzando decisioni dipendenti dalla fosforilazione nelle risposte al danno al DNA. Attraverso queste funzioni, incide sulla proliferazione, sulla stabilità genomica e sui programmi di segnalazione legati all’apoptosi. Un’espressione deregolata di CCNG1, o la dipendenza dal contesto della via di p53, è stata osservata in diversi tipi di tumore, rendendolo un nodo utile per studiare le risposte allo stress oncogenico e la fitness delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin G1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCNG1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCNG1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCNG1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cyclin G1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCNG1 per lo studio della segnalazione di cyclin G1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CCNG1 critici per la funzione di cyclin G1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCNG1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cyclin G1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cyclin G1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCNG1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cyclin G1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cyclin G1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCNG1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCNG1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.