Plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin G1 (h): sc-402045
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- cyclin G1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique cyclin G1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: cyclin G1 Antibody (F-5): sc-8016
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin G1 (h) | sc-402045 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CCNG1 code la cycline G1, une cycline atypique rapidement induite par le stress cellulaire, qui intègre les signaux du réseau p53 afin de moduler la progression du cycle cellulaire et le contrôle des points de contrôle. La cycline G1 participe à la régulation en rétroaction de l’activité de p53 via des complexes associés à des phosphatases, influençant des décisions dépendantes de la phosphorylation dans les réponses aux dommages de l’ADN. Par ces fonctions, elle affecte la prolifération, la stabilité génomique et des programmes de signalisation liés à l’apoptose. Une expression dérégulée de CCNG1, ou une dépendance au contexte de la voie p53, a été observée dans de nombreux types de cancers, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les réponses au stress oncogénique et l’aptitude des cellules tumorales.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin G1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CCNG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CCNG1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CCNG1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cyclin G1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CCNG1 pour l'étude de la signalisation de cyclin G1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CCNG1 essentiels à la fonction de cyclin G1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CCNG1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le cyclin G1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le cyclin G1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CCNG1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le cyclin G1 plasmide HDR (h) et le cyclin G1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CCNG1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CCNG1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.