Plasmide Double Nickase (m) cyclin F: sc-419514-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) cyclin F correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide cyclin F Double Nickase (m) et le plasmide cyclin F Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ccnf. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) cyclin F | sc-419514-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) cyclin F | sc-419514-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Ccnf** code la cycline F, une protéine à boîte F qui constitue le composant de reconnaissance des substrats du complexe ligase E3 d’ubiquitine SCF (SKP1–CUL1–F-box) et relie la progression du cycle cellulaire à la protéostasie dépendante de l’ubiquitine. La cycline F contribue à coordonner les transitions S/G2 et G2/M en ciblant des régulateurs spécifiques de la réplication de l’ADN et de l’entrée en mitose pour leur dégradation par le protéasome, influençant ainsi la stabilité du génome et le contrôle des points de contrôle. Par ces fonctions, elle interagit avec des voies gouvernant les réponses au stress de réplication, l’homéostasie des centrosomes et la signalisation des dommages à l’ADN. La dérégulation de l’ubiquitination médiée par la cycline F a été associée à une altération du contrôle du cycle cellulaire et à des mécanismes liés à la neurodégénérescence, ce qui souligne sa pertinence pour l’étude des troubles prolifératifs et de la vulnérabilité neuronale.
cyclin F Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ccnf dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ccnf. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ccnf. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ccnf.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.