cyclin D3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400634-ACT

CCND3はサイクリンD3をコードしており、サイクリンD3はCDK4/6と複合体を形成してRBファミリータンパク質をリン酸化し、細胞周期のG1/S移行を促進する制御性サイクリンです。E2F依存性転写の制御および増殖因子（マイトジェン）刺激の統合を通じて、サイクリンD3は造血系およびリンパ系系統において、増殖と分化プログラムの協調に寄与します。CCND3の発現や活性の破綻は細胞周期制御の異常と関連しており、サイクリンD–CDK活性が亢進するがん原性シグナル伝達の文脈で関与が示唆されています。そのためCCND3は、増殖、チェックポイント制御、系統特異的な増殖制御を司る経路において広く研究されています。

cyclin D3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CCND3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cyclin D3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CCND3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCCND3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cyclin D3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCCND3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcyclin D3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCCND3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcyclin D3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。