Plasmide CRISPR d'Activation (h) cyclin D3: sc-400634-ACT

CCND3 code la cycline D3, une cycline régulatrice qui s’associe à CDK4/6 pour phosphoryler les protéines de la famille RB et favoriser la progression du cycle cellulaire de G1 vers S. En contrôlant la transcription dépendante d’E2F et en intégrant les signaux mitogènes, la cycline D3 contribue à coordonner la prolifération avec les programmes de différenciation dans les lignées hématopoïétiques et lymphoïdes. Une expression ou une activité dérégulée de CCND3 a été associée à une altération du contrôle du cycle cellulaire et est impliquée dans des contextes de signalisation oncogénique où l’activité cycline D–CDK est augmentée. Par conséquent, CCND3 est largement étudié dans les voies qui régissent la prolifération, la régulation des points de contrôle et le contrôle de la croissance spécifique de lignée.

cyclin D3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCND3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cyclin D3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCND3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCND3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cyclin D3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCND3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cyclin D3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cyclin D3 dans les cellules tumorales présentant une expression de CCND3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.