Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin D1 (h): sc-400047
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- cyclin D1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique cyclin D1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: cyclin D1 Antibody (A-12): sc-8396
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin D1 (h) | sc-400047 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CCND1 code la cycline D1, un régulateur central de la transition G1/S du cycle cellulaire, qui active CDK4/6 afin de phosphoryler les protéines de la famille RB et de favoriser la transcription dépendante d’E2F. La cycline D1 intègre les signaux mitogènes et nutritionnels en aval de voies telles que RTK–RAS–MAPK et PI3K–AKT, coordonnant la prolifération avec le contrôle de la croissance et l’intégrité des points de contrôle. Une expression dérégulée de CCND1 ou un gain du nombre de copies est fréquemment associé à une entrée aberrante en cycle cellulaire et à une instabilité génomique, ce qui en fait une caractéristique moléculaire couramment étudiée dans la tumorigenèse et les réseaux de signalisation oncogénique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin D1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CCND1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CCND1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CCND1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cyclin D1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CCND1 pour l'étude de la signalisation de cyclin D1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CCND1 essentiels à la fonction de cyclin D1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CCND1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le cyclin D1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le cyclin D1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CCND1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le cyclin D1 plasmide HDR (h) et le cyclin D1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CCND1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CCND1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.