cyclin D1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400047

Panoramica

CCND1 codifica la ciclina D1, un regolatore chiave della transizione del ciclo cellulare G1/S che attiva CDK4/6 per fosforilare le proteine della famiglia RB e promuovere la trascrizione dipendente da E2F. La ciclina D1 integra segnali mitogenici e nutrizionali a valle di vie quali RTK–RAS–MAPK e PI3K–AKT, coordinando la proliferazione con il controllo della crescita e l’integrità dei checkpoint. Una deregolazione dell’espressione di CCND1 o un aumento del numero di copie è frequentemente associata a un ingresso aberrante nel ciclo cellulare e a instabilità genomica, rendendola una caratteristica molecolare comune studiata nella tumorigenesi e nelle reti di segnalazione oncogeniche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin D1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCND1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCND1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCND1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cyclin D1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCND1 per lo studio della segnalazione di cyclin D1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CCND1 critici per la funzione di cyclin D1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCND1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cyclin D1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cyclin D1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCND1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cyclin D1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cyclin D1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCND1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCND1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.