Plásmido CRISPR de Activación (h) cyclin C: sc-402308-ACT

El gen humano **CCNC** codifica la **ciclina C**, una ciclina transcripcional que se asocia con **CDK8** o **CDK19** dentro del módulo quinasa del **complejo Mediator** para modular la transcripción dependiente de la **ARN polimerasa II**. Mediante la regulación de programas génicos sensibles a estímulos, la ciclina C influye en la progresión del ciclo celular, la adaptación metabólica y la señalización de estrés, incluidas vías que controlan la dinámica mitocondrial y la apoptosis. La actividad de **CCNC** se entrecruza con las redes transcripcionales de **WNT/β-catenina**, **TGF-β** y **NF-κB**, conectando la señalización del módulo quinasa de Mediator con procesos del desarrollo y la inflamación. La desregulación de la función **CCNC/CDK8–Mediator** se ha asociado con estados transcripcionales alterados observados en el cáncer y en otras enfermedades caracterizadas por un control perturbado de la expresión génica.

cyclin C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCNC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

cyclin C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCNC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCNC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de cyclin C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCNC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de cyclin C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía cyclin C en células tumorales con expresión de CCNC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.