CYB5R3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404764-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYB5R3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYB5R3 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYB5R3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYB5R3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CYB5R3: sc-398043
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYB5R3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404764-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYB5R3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404764-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYB5R3 kodiert die Cytochrom-b5-Reduktase 3, ein NADH-abhängiges Flavoprotein, das Elektronen auf Cytochrom b5 und andere Akzeptoren überträgt und damit den Häm- und Lipidstoffwechsel unterstützt. Es trägt zur zellulären Redox-Homöostase bei und beeinflusst Signal- und Stoffwechselwege wie die Desaturierung/Elongation von Fettsäuren, die Cholesterinbiosynthese sowie den Schutz vor oxidativem Stress durch die Aufrechterhaltung reduzierter Cofaktoren. Die Aktivität von CYB5R3 ist außerdem mit der Reduktion von Methämoglobin in Erythrozyten und einer weiter gefassten Regulation von Elektronenübertragungsprozessen in Mitochondrien und endoplasmatischem Retikulum verknüpft. Genetische oder funktionelle Störungen von CYB5R3 wurden mit Methämoglobinämie und verwandten Phänotypen einer Redox-Dysbalance in Verbindung gebracht, was es für die Untersuchung von Elektronentransfer-Defiziten und metabolischen Stressantworten relevant macht.
CYB5R3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYB5R3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYB5R3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYB5R3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYB5R3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.