CX3CR1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419886

Panoramica

Cx3cr1 codifica CX3CR1, un recettore chemiokinico a sette domini transmembrana per CX3CL1 (fractalkine) che regola l’adesione leucocitaria, la chemiotassi e la sorveglianza tissutale. Nel topo, CX3CR1 è espresso in modo prominente da monociti/macrofagi, cellule dendritiche e microglia, collegando la segnalazione dei GPCR chemiokinici al rimodellamento del citoscheletro, all’attivazione delle integrine e a programmi trascrizionali infiammatori. Le vie dipendenti da CX3CR1 modellano l’omeostasi della microglia e la comunicazione neuro-immunitaria, e sono inoltre implicate nell’infiammazione vascolare e nel traffico delle cellule mieloidi nei tessuti periferici. Di conseguenza, Cx3cr1 è ampiamente utilizzato come marcatore e come nodo funzionale in modelli di neuroinfiammazione, aterosclerosi e disturbi infiammatori cronici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CX3CR1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cx3cr1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cx3cr1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cx3cr1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CX3CR1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cx3cr1 per lo studio della segnalazione di CX3CR1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cx3cr1 critici per la funzione di CX3CR1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cx3cr1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CX3CR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CX3CR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cx3cr1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CX3CR1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CX3CR1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cx3cr1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cx3cr1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.