CTMP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429205

Panoramica

Them4 codifica CTMP (carboxyl-terminal modulator protein), un regolatore associato alla membrana noto soprattutto per la modulazione della segnalazione AKT/PKB. CTMP può legare AKT e influenzarne lo stato di fosforilazione, collegando Them4 al controllo, mediato dalla via PI3K–AKT, della sopravvivenza cellulare, del metabolismo e delle risposte allo stress. Nei sistemi murini, un’attività alterata di CTMP è stata associata a cambiamenti nella funzione mitocondriale, nella gestione dello stress ossidativo e in processi legati all’apoptosi. Poiché la segnalazione PI3K–AKT è ampiamente implicata in fenotipi infiammatori, metabolici e neurodegenerativi, Them4 viene spesso studiato come nodo di connessione tra le dinamiche di segnalazione e stati cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CTMP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Them4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Them4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Them4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CTMP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Them4 per lo studio della segnalazione di CTMP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Them4 critici per la funzione di CTMP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Them4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CTMP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CTMP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Them4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CTMP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CTMP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Them4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Them4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.