CTLA-4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400948-ACT

Humanes **CTLA4** kodiert **CTLA-4 (CD152)**, einen inhibitorischen Immuncheckpoint-Rezeptor, der überwiegend auf aktivierten T-Zellen und regulatorischen T-Zellen exprimiert wird und die T-Zell-Aktivierung bremst, indem er mit **CD28** um die Bindung an **CD80/CD86** auf antigenpräsentierenden Zellen konkurriert. Durch die Abschwächung kostimulatorischer Signale moduliert CTLA-4 nachgeschaltete Signalwege, darunter **PI3K–AKT**, **NF-κB** und **MAPK**, trägt zur Aufrechterhaltung der peripheren Toleranz bei und begrenzt eine überschießende Zytokinproduktion. Eine fehlregulierte CTLA-4-Expression oder -Signalübertragung wird mit dem Verlust der Immunhomöostase und veränderten Lymphozytenantworten in Verbindung gebracht, die an autoimmunen und entzündlichen Phänotypen beteiligt sind. Als zentraler Knoten in immunregulatorischen Netzwerken wird **CTLA4** breit untersucht, u. a. im Kontext funktioneller T-Zell-Zustände, antigengetriebener Aktivierungsdynamiken und Mechanismen der Immunsuppression.

CTLA-4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CTLA4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CTLA-4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CTLA4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CTLA4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CTLA-4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CTLA4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CTLA-4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CTLA-4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CTLA4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.